如何选择合适细胞的消化酶-重组胰酶和动物源胰酶

在使用胰酶（Trypsins）细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。
胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差，做流式时的CD Marker也可能会下降。
胰酶进行分装时尽量分装成多瓶，并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时液体体积会膨胀，多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并可能造成污染。
胰酶适用于消化细胞间质较少的软组织和传代细胞，如胚胎、上皮、肝、肾等组织，但对于纤维性组织和较硬的癌组织效果较差。胰酶消化效果主要与pH值、温度、胰酶浓度、组织块大小和硬度有关。

❤  注意：不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才表示消化好了。

一般肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙状移动就可以了，这时就应该停止消化。

如何进行细胞消化

对大部分细胞消化来说，可以在消化到差不多快要脱落的时候，移除大部分胰酶，然后直接加新鲜的培养基将细胞吹打下来，省去离心步骤。残余的胰酶含量很低，所以不会对细胞产生任何影响。
对于难消化的细胞，如HCT15, LS411和KM12，用不含Ca2+，Mg2+的PBS洗涤一次后，加入稍微多一点胰酶，置37ºC彻底消化（一般为几分钟）至脱落（一晃细胞就掉下来），然后再加培养基终止胰酶反应、离心 (若是无血清培养基，需改加胰酶抑制剂)。这么做的道理是，细胞消化不彻底，势必会增加吹打辅助脱落的次数，而吹打次数越多，细胞活性越差。
若细胞消化过度，可以加入血清终止胰酶对细胞的继续作用，因为血清中含有蛋白可与胰酶结合，利用竞争抑制原理，中和胰酶消化，不能直接用胰酶吹打。应加入过量血清，约为胰酶的1-2倍，然后离心去上清，培养基重悬，这时应该注意将细胞吹散，因为一般胰酶消化过度之后细胞容易聚集成团，不吹散的话会严重影响细胞状态。吹打不宜过猛，20下左右，肉眼完全看不到颗粒状悬浮后再吹几下即可。

BI提供动物来源的传统胰酶及基因工程生产的重组胰蛋白酶。

货号：03-079-1B

动物胰酶普遍用于血清培养，不同的细胞加入胰酶的成分和浓度不一样。贴壁不牢和半贴壁细胞尽量使用浓度0.05%不含EDTA的胰酶且不需要放在培养箱孵育，这样易于控制，对细胞的伤害也降到最低。对于难消化的细胞就需要使用含EDTA的0.25%的胰酶，而不是无限地延长消化时间。
EDTA有什么作用呢？许多人不用胰酶，只用EDTA，或者用胰酶/EDTA联合作用。胰酶切割ECM负责粘连和附着的蛋白，而EDTA通过螯合Ca2+，抑制Integrin的贴壁活性，所以EDTA的作用更加温和。
重组胰酶用于无血清培养。重组胰酶具有与动物源性胰蛋白酶相同的酶学性质，但是不含任何动物源成分，可替代胰蛋白酶使用（常用于细胞治疗）。
BI生产的重组胰酶Recombinant Trypsin EDTA Solution ，堪称传统胰酶的完美替代者。无杂酶，无外源性或内源性病毒污染，无PMSF（蛋白酶抑制剂）、EDTA等任何蛋白酶抑制剂，较传统的胰酶使用方便，在细胞培养实验中减少了很多不必要的操作，细胞培养效果大大提高。