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Red / ET重组技
发表时间:[2020-05-15 13:51:45]
重组工程指recombi民族介导的遗传演义neerin 克,并指定一个明确定义和DNA的精确变形。这项杰出的技术是1990年代后期由德国海德堡欧洲分子生物学实验室(EMBL)的A. Francis Stewart小组开发的。
Gene Bridges的Red / ET重组技术是一种体内反应,基于噬菌体λ 的红色基因或Rac噬菌体的rec E / rec T基因。各个基因簇在人工启动子系统的控制下,因此可诱导在大肠杆菌宿主细胞中表达重组支持酶。两个同源DNA分子之间的重组是通过两个相应的蛋白质伴侣的功能相互作用来介导的,其中Redα或RecE充当5'→3'核酸外切酶,而Redβ或RecT充当DNA单链结合蛋白。DNA分子中的至少一个必须是线性的,且两侧均具有相似的同源性区域。
最重要的是,由于同源区域的序列可以自由选择,因此只有50 bp的同源臂可在任何所需位置进行核苷酸精确的DNA修饰,而不受限制位点的限制。此外,可以使用DNA延伸进行DNA工程改造,DNA延伸范围从短的寡核苷酸到10 kb或更大的较大片段。因此,重组适合广泛的应用,例如从大的DNA分子(BAC,细菌染色体)亚克隆到质粒主链,DNA片段的插入或缺失以及将点突变引入开放阅读框。
Red / ET技术是一种复杂的工具,可以解决各种各样的科学问题,例如,创建用于生成动物模型和任何可能的BAC修饰的量身定制的构建体,以及用于染色体的修饰,例如用于路径工程。